2019-04-03

深度报道 | 如何“傻瓜式”快速检测非洲猪瘟?

焦点会议  

导语

非洲猪瘟进军中国已有八个月余,蔓延我国28个省市,官方报道发病114起,造成了中国养猪业的巨大经济损失。因为非瘟无苗可用且无药可救的特点,目前人们对于非洲猪瘟防控的关注点主要在监测和生物安全两个层面。在监测层面上,检测非洲猪瘟对实验室环境、技术人员、仪器设备和检测试剂都有着高标准。面对非瘟泛滥的局面,政府逐步放松了非洲猪瘟的相关检测政策,鼓励企业自检。于是,学习提高非瘟的检测技术成为了养猪人的“必修课”。

2019年1月16日,胡春华副总理专程到广东广州调研,并主持召开了中南六省区非洲猪瘟防控工作的座谈会,要求加快建立非洲猪瘟防控运行协调机制。中南区域省市自去年10月非瘟进入以来,一共暴发疫情19起。广东省农业农村厅副巡视员刘付启荣在致辞中说道,监测是防控动物疫病基础,是制定防控建设的一级依据。为做好中南六省区非洲猪瘟分期防控工作,打好非洲猪瘟防控攻坚战持久战,在现有基础上进一步提升非洲猪瘟的诊断监测与防控基础水平,举办了此次中南区域非洲猪瘟检测技术进阶培训班。

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广东省农业农村厅副巡视员刘付启荣

为此,2019年3月28日,由中国兽医协会主办,中国兽医协会兽医实验室检测分会、北京世纪元亨动物防疫技术有限公司、动物用生物制品国家工程研究中心和青岛瑞尔生物技术有限公司承办的“中南区域非洲猪瘟检测技术进阶培训班”顺利开班。中国兽医协会兽医实验室检测分会会长陈西钊主持本次培训班。

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培训班现场

本次培训班的协办单位是广东省动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、海南省动物疫病预防控制中心、湖南省动物疫病预防控制中心、江西省动物疫病预防控制中心和广东省畜牧兽医学会,并且由国家非洲猪瘟专业实验室—中国农科院哈尔滨兽医研究所和国家非洲猪瘟区域实验室—华南农业大学单位支持。广东省畜牧兽医学会理事长廖明希望,通过这次培训,大家能够掌握相关的检测技术,调整防御理念。

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广东省畜牧兽医学会理事长廖明

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主持人:中国兽医协会兽医实验室检测分会会长陈西钊

非洲猪瘟病毒检测作用逐渐凸显

中国农业科学哈尔滨兽医研究所研究员仇华吉指出,非洲猪瘟的病毒,具有庞大而复杂的基因组、超强的体外生存能力、独特的宿主和生态循环,其传播源和传播途径亦十分复杂。因为非洲猪瘟病毒的特点,导致非洲猪瘟的防控工作难以执行。除此之外,中国动物疫病预防控制中心副主任辛盛鹏认为其中还有诸多风险因子的共同作用,比如,人流、车流、屠宰场污染、冻肉污染、泔水饲喂行为等。

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中国动物疫病预防控制中心副主任辛盛鹏

针对非洲猪瘟的防控难的问题,二位专家也提出了诸多意见。仇华吉认为,提高疫情的发现能力,是有效遏制非洲猪瘟蔓延的对策之一。通过扩大检测范围和提高检测能力,从而对疾病开展早期的检测和诊断,在源头遏制非洲猪瘟的传播。而辛盛鹏提出,屠宰厂是非洲猪瘟的放大器,需要加强屠宰环节中非洲猪瘟的检测。3月15日,农业农村部发布了关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测工作的通知。通知中要求跨省销售生猪产品和年屠宰10万头以上的屠宰企业以及生猪屠宰、加工一体化企业最迟于4月1日前开展非洲猪瘟自检;年屠宰5万头以上的屠宰企业最迟于5月1日前开展自检;其他屠宰企业最迟于7月1日前开展自检。

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中国农业科学哈尔滨兽医研究所研究员仇华吉

由此可见,掌握非洲猪瘟的检测技术已经成为了非洲猪瘟防控中的必备技能之一。然而,同我国养殖场规模一样,养殖人员的素质和技术、实验室环境和仪器设备都是参差不齐的。所以,寻求一种便捷、高效且易学易操作的检测技术显得尤为重要。

监测在非洲猪瘟防控中扮演重要角色

监测具有发现病原、为防控政策的制定提供科学依据、建立模型,发现流行规律、预警预报等作用。广东省畜牧兽医学会秘书长卢受昇建议,建立区域非洲猪瘟监测平台。通过制定区域内非洲猪瘟监测计划,共享监测结果;通过定期开展分析研判预警,及时调整区域防控策略。在平台上,统一公布区域内非洲猪瘟检测实验室名单,区域内非洲猪瘟所有相关实验室检测结果全区域互认;推动在区域内建立科研性质的区域专业实验室,开展非洲猪瘟等重大动物疫病研究和关键技术贮备。

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广东省畜牧兽医学会秘书长卢受昇

调查显示,社会大环境病毒量控制在一定阈值以下非洲猪瘟就不会流行。而养殖场将小环境中的疫毒控制在一定阈值以下就可以保证猪的安全。所以,卢受昇认为,降低区域内病毒载量是非洲猪瘟防控的根本出路,开展基于风险的监测是非瘟防控的重要举措。其中还涉及到监测点的选择以及比例问题。除了在猪场需要设置监测点,对猪场的人、车、猪等进行采样监测,在屠宰场、预检点等非洲猪瘟病毒传播链上的场所,也同样需要对非洲猪瘟进行监测。

检测“非瘟”技术和产品的现状

关于非洲猪瘟的监测政策,可监测单位由2018年8月的6家单位,增加到10月的各省认证省内实验室检测的二十几家。今年1月,农业部鼓励企业自检、屠宰企业必检、加工企业要检。由此可以看出,非洲猪瘟的监测政策是在不断放宽的,目的就是为了让非洲猪瘟能够被及早发现及时处理。

各省市县疫控中心、实验室等单位既具有检测非洲猪瘟的仪器设备,也具有可以操作检测非洲猪瘟的技术人员。然而,当企业被要求自检非洲猪瘟时,仪器设备和人员缺乏的问题就暴露出来了。对于屠宰企业、食品加工企业、饲料类企业以及小型养殖户,在非洲猪瘟的检测上是白纸一张,更别说懂得如何选择非洲猪瘟的检测产品,北京世纪元亨动物疫病技术有限公司销售总监赵铁柱说道。针对这一部分人群执行非洲猪瘟检测,他建议企业选择专门针对非洲猪瘟的快速检测的试纸卡片。在产品选择上主要考虑特异性、灵敏度、稳定性和准确性等因素,再从价格等方面综合考虑,选择适合自身企业的产品。 

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北京世纪元亨销售总监赵铁柱

选好检测非瘟产品,学好检测非瘟技术

非洲猪瘟的诊断方法按原理分为两种,一种是荧光PCR,一种免疫层析。两种检测方法对非洲猪瘟都具备一定的特异性和敏感性。哈尔滨国生生物科技股份有限公司副研究员王牟平分析了两种诊断方法的利弊。他认为快速检测试纸条因其操作简单快捷的特点,主要应用于发病诊断上。在发现疫情后能马上精准而快速地实施相应措施。而荧光PCR检测则主要用于对饲料、水、废弃物、空气、土壤、人等猪场各要素进行检测,最终构建合格的生物安全防控体系。两种诊断方法应当配套使用,从而可以提高准确率,避免出现误诊。

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哈尔滨国生生物副研究员王牟平

王牟平推荐使用非洲猪瘟乳胶微球抗原快速检测卡。该检测试纸条技术由哈兽研、青岛瑞尔、国生生物三家联合,从西班牙INGENASA(英吉纳)公司引进,具有良好特异性和敏感性。它采用全血检测,含有特制样品垫、特制缓冲液和彩色乳胶微球,达到快速检测,结果清晰易判的效果。

针对非洲猪瘟PCR检测技术,北京世纪元亨动物防疫技术有限公司技术总监徐宗香解释了PCR的作用原理,也分享了自己的经验。荧光PCR技术检测非洲猪瘟的流程分为三步,一是样品的收集和提取;二是模板的制备,即核酸的提取;三是反应体系的配制。他认为,PCR检测技术对操作人员的素质能力和对PCR原理的知识储备是有要求的。否则,在操作和读取数据时都容易出现纰漏。同时,荧光PCR检测技术还存在如下的现实问题。检测环节多,质量控制点多;操作相对复杂,反应时间较长;试剂组分多,需要自行配制;分区进行,环境控制要求严格等。

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北京世纪元亨技术总监徐宗香

在PCR检测结果上,更是存在着假阴性、假阳性和数据分析等问题。那么,没有工作基础的人员或是初级检测实验室该如何对非洲猪瘟进行有效的荧光PCR检测呢?徐宗香推荐使用T8快速荧光PCR检测体系和16A快速荧光PCR检测体系。快速、简便、可靠的病毒核酸(荧光PCR)检测体系——T8快速荧光PCR检测体系,检测非洲猪瘟的整个流程只需要30分钟,它具有免核酸提取、免配液、免扩增程序设置和帮助人员进行结果判定等特点。而16A快速荧光PCR检测体系具有无需提取、无需配液、简单操作、一步到位等特点,能精准检测,精确防控,为非洲猪瘟检测工作带来更快捷、更专业的体验。T8和16A快速荧光PCR检测体系真正降低了对人员和环境的要求,实现了非洲猪瘟PCR检测技术的“傻瓜式”操作的可能。

实践是检验真理的唯一标准

培训班的最后,由青岛瑞尔生物技术有限公司技术经理曹瑞和北京世纪元亨动物防疫技术有限公司技术总监徐宗香,分别对非洲猪瘟病毒免疫学检测技术及注意事项和非洲猪瘟病毒快速实时荧光PCR检测及注意事项进行讲解和实操。即在培训班的现场,对推荐的非洲猪瘟检测产品,非洲猪瘟乳胶微球抗原快速检测卡、非洲猪瘟乳胶微球抗原快速检测卡以及T8快速荧光PCR检测体系,进行操作演示。

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青岛瑞尔生物技术经理曹瑞

然而,正如曹瑞所说,检测的结果有可能因为血液样品保存不当或溶血、试剂回温失误等原因而受到影响。同时,徐宗香表示T8快速荧光PCR检测体系,针对临床动物疫病突发、零散等特点量身定制。三十分钟检测24种疫病,为精准检测广泛应用提供技术支撑,让动物疫病快速筛查走进基层变成现场。卢受昇亦从实验中发现,消毒药会影响PCR检测非洲猪瘟的结果。所以,选择适用的检测产品只是第一步,还要重视检测操作过程中的注意事项,做好监测的每一步。

卢受昇表示,建立结构性非洲猪瘟的监测系统,在有足够多的真实数据支撑下,是有望对非洲猪瘟进行准的预警和预判的。在非洲猪瘟的检测技术领域上,还有许多可以研究的方向,比如,是否能够有检测技术能够鉴别非洲猪瘟的活性等。监测是否有效,检测技术是否发展革新,仍需要养猪行业各个组成部分的共同努力。

文/ 关晓华 吴沛燕 (爱猪网记者/编辑)