普境安粉末对降低猪蓝耳病病毒（PRRSv）活性的评估

Casey Rabbe¹; Deb Murray,兽医学博士 ²; Amanda Sponheim³,兽医学博士

¹明尼苏达大学，保罗大街，明尼苏达；²New Fashion Pork, Jackson,明尼苏达；³Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc., 约瑟夫大街，密苏里州

在试验 1 中，干净、干燥的橡胶靴（n=24）被随机分配到两个试验组中的一个（12/应用）。试验组由包含普境安粉末（Vitfoss；Graasten、丹麦）或加强液体消毒剂（ProAg；Winnipeg，Manitoba)的靴子清洁槽组成，按照制造商的说明在温度为 85°F 的环境下进行。第一次在每只靴子底部用 Swiffer® Sweeper 棉块涂抹，这个棉块浸泡30mL2:3 稀释的去离子中和液体培养基中。取样后，将每个棉块中的液体挤进一个塑料袋中，用吸液器取出 10mL。然后将这些液体放置在一个收集管中，并通过 PCR 分析来验证病毒的存在。

这个技术用于在此试验期间进行的所有测试。此外，每只靴子都被放置在各自的清洁槽中，然后再进行 Swiffer 棉块取样，使用 PCR 进行检测，以验证在试验开始前每一次清洁时PRRSv 的存在。

将 1mL 的 PRRS 疫苗添加到 99mL 的无菌水里，来回颠倒 5 分钟，使其完全混合。使用注射器，将 1;100 稀释后的 2mL 疫苗接种到每只靴子的底部（图 1）。然后，对接种后的靴子进行 Swiffer 棉块取样，并通过 PCR 进行检测，以确认病毒的存在。在每个试验组的每个清洁槽中连续放置接种的靴子，在农场条件下进行模拟。消毒后 1 分钟，对靴子进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测（图 2）。通过口服和内腔的途径，选择了一种典型的 PRRSv 感染剂量接种稀释。通过将 5 个阳性接种样本提交给两个独立的诊断试验室，验证了对这种稀释疫苗加中和液体培养基进行 PRRSv PCR 试验和收集方法的敏感性。

图一

图二

将同样稀释的 2mL 的 PRRS 疫苗应用于四分之一纸杯容量的 PCR 阴性粪便，然后混合（图3）。之后将粪便涂抹于每只靴子的底端（图 4），进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测，来确认病毒的存在（12/应用）。在每个试验组的每个清洁槽中连续放置接种的靴子，消毒后 1 分钟，对靴子的底部进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测。该试验（有无粪便）在消毒 3 分钟和 5 分钟后重复取样。对每个试验组（12/应用）的每个清洁槽进行取样，并通过 PCR 检测。

图三

图四

在试验 2 中，环境温度为 8℉（此温度低于液体消毒剂的凝固点)。在这个温度下重复使用与试验 1 相同的方法；消毒后 1 分钟、3 分钟、5 分钟；靴子底部是否存在粪便。在这个温度下，液体消毒剂凝固，无法进行测试。

试验 3 在田间条件下进行，来验证夏季粪便存在时普境安粉末的使用效果。对 PRRSv 阴性的单批断奶仔猪进行试验。在进入仔猪 8 周的时间内，对 3 个保育舍每天进入的仔猪，进行每周 5 天的取样。送到保育舍的时候，小猪已经接种了 PRRS 疫苗。将普境安粉末靴子清洁槽放置在现场和每个圈舍的入口。要求工人在出入每一个圈舍时需踏进靴子清洁槽。第一批到达保育室的 30 头仔猪，送来一周后，开始每周进行抽血，以确认疫苗病毒感染情况。每天对一名工人的靴子底部进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测。

结论与探讨

试验 1 和 2 中，对 260 个 Swiffer 棉块进行取样和 PCR 检测，来验证 PRRS 的存在。在所有条件下，两种产品都没有得到 100%的 PRRSv PCR 阴性结果（见表 1 和表 2）。增加暴露时间也并没有改善(P＞0.10)其中一种消毒剂的效果。粪便的存在显著降低了液体消毒剂的有效性，但对普境安没有明显的影响。在没有粪便存在的情况下，与普境安（应用 x 粪便，P＜0.0001）相比，液体消毒剂似乎更有效。

在 8℉和 85 ℉的温度下，普境安的效用没有明显差别(P＞0.10)，在有无粪便存在的条件下，在这两个温度环境中平均 95.8%和 86.2% 的样本分别显示 PCR 阴性。在 8℉的温度下，液体消毒剂凝固失效。85℉的温度环境中，有无粪便存在的条件下，液体消毒剂平均 28%和 97.3%的样本分别显示 PCR 阴性。每个靴子清洁槽和 PRRSv PCR 结果之间没有相关性。

在试验 3 中，收集了 210 个血清样本和 40 个 Swiffer 棉块样本，并进行 PRRSv PCR 检测。100%的血清样本检测呈阳性，在检测现场确认感染和疫苗病毒脱落。100%的靴子 Swiffer 棉块样本 PRRSv PCR 检测呈阴性，这表明普境安在实际的保育室环境中，在疫苗病毒感染和脱落存在的情况下有效。 

普境安显示了对液体消毒剂是一种可行的替代产品，可以作为靴子消毒剂，以及在粪便存在和凝固点温度下提供优势。关于病毒失活的结论需要进一步的研究，需使用病毒隔离技术和生物分析来确定病毒的生存能力。

参考文献

1. Hermann, J.R. et al. Probability of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus infection as a function of exposure route and dose. Veterinary Microbiology. 2005: 7–16.

 

2. Kenney, K and D. Polson. Validation of Swiffer cloth-origin neutralizing broth samples for detection of PRRS virus in the environment. Proc. AASV. 2011: 95–107.