普境安粉末对降低猪蓝耳病病毒(PRRSv)活性的评估

爱猪网 2017-12-29 09:56:22

Casey Rabbe¹; Deb Murray,兽医学博士 ²; Amanda Sponheim³,兽医学博士

¹明尼苏达大学,保罗大街,明尼苏达;²New Fashion Pork, Jackson,明尼苏达;³Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc., 约瑟夫大街,密苏里州

简介

防止猪蓝耳病病毒(PRRSv)在猪群之间传播是猪肉生产商的主要目标。许多养猪场用液体消毒剂消毒靴子作为生物安全计划的一部分,目的就是尽量减少 PRRSv 的传播。在目前,使用液体消毒剂的时候,出现了几个问题,包括在粪便污染物存在以及在冰冻温度下的效果。此研究的目的是检测普境安,一种干粉质地的环境改良产品,作为液体消毒剂的替代品,在不同的温度,以及排泄物是否存在的情况下对 PRRSv 的破坏效果。

材料与方法

在试验 1 中,干净、干燥的橡胶靴(n=24)被随机分配到两个试验组中的一个(12/应用)。试验组由包含普境安粉末(Vitfoss;Graasten、丹麦)或加强液体消毒剂(ProAg;Winnipeg,Manitoba)的靴子清洁槽组成,按照制造商的说明在温度为 85°F 的环境下进行。第一次在每只靴子底部用 Swiffer® Sweeper 棉块涂抹,这个棉块浸泡30mL2:3 稀释的去离子中和液体培养基中。取样后,将每个棉块中的液体挤进一个塑料袋中,用吸液器取出 10mL。然后将这些液体放置在一个收集管中,并通过 PCR 分析来验证病毒的存在。

这个技术用于在此试验期间进行的所有测试。此外,每只靴子都被放置在各自的清洁槽中,然后再进行 Swiffer 棉块取样,使用 PCR 进行检测,以验证在试验开始前每一次清洁时PRRSv 的存在。

将 1mL 的 PRRS 疫苗添加到 99mL 的无菌水里,来回颠倒 5 分钟,使其完全混合。使用注射器,将 1;100 稀释后的 2mL 疫苗接种到每只靴子的底部(图 1)。然后,对接种后的靴子进行 Swiffer 棉块取样,并通过 PCR 进行检测,以确认病毒的存在。在每个试验组的每个清洁槽中连续放置接种的靴子,在农场条件下进行模拟。消毒后 1 分钟,对靴子进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测(图 2)。通过口服和内腔的途径,选择了一种典型的 PRRSv 感染剂量接种稀释。通过将 5 个阳性接种样本提交给两个独立的诊断试验室,验证了对这种稀释疫苗加中和液体培养基进行 PRRSv PCR 试验和收集方法的敏感性。

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图一

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图二

将同样稀释的 2mL 的 PRRS 疫苗应用于四分之一纸杯容量的 PCR 阴性粪便,然后混合(图3)。之后将粪便涂抹于每只靴子的底端(图 4),进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测,来确认病毒的存在(12/应用)。在每个试验组的每个清洁槽中连续放置接种的靴子,消毒后 1 分钟,对靴子的底部进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测。该试验(有无粪便)在消毒 3 分钟和 5 分钟后重复取样。对每个试验组(12/应用)的每个清洁槽进行取样,并通过 PCR 检测。

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图三

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图四

在试验 2 中,环境温度为 8℉(此温度低于液体消毒剂的凝固点)。在这个温度下重复使用与试验 1 相同的方法;消毒后 1 分钟、3 分钟、5 分钟;靴子底部是否存在粪便。在这个温度下,液体消毒剂凝固,无法进行测试。

试验 3 在田间条件下进行,来验证夏季粪便存在时普境安粉末的使用效果。对 PRRSv 阴性的单批断奶仔猪进行试验。在进入仔猪 8 周的时间内,对 3 个保育舍每天进入的仔猪,进行每周 5 天的取样。送到保育舍的时候,小猪已经接种了 PRRS 疫苗。将普境安粉末靴子清洁槽放置在现场和每个圈舍的入口。要求工人在出入每一个圈舍时需踏进靴子清洁槽。第一批到达保育室的 30 头仔猪,送来一周后,开始每周进行抽血,以确认疫苗病毒感染情况。每天对一名工人的靴子底部进行 Swiffer 棉块取样和 PCR 检测。

结论与探讨

试验 1 和 2 中,对 260 个 Swiffer 棉块进行取样和 PCR 检测,来验证 PRRS 的存在。在所有条件下,两种产品都没有得到 100%的 PRRSv PCR 阴性结果(见表 1 和表 2)。增加暴露时间也并没有改善(P>0.10)其中一种消毒剂的效果。粪便的存在显著降低了液体消毒剂的有效性,但对普境安没有明显的影响。在没有粪便存在的情况下,与普境安(应用 x 粪便,P<0.0001)相比,液体消毒剂似乎更有效。

在 8℉和 85 ℉的温度下,普境安的效用没有明显差别(P>0.10),在有无粪便存在的条件下,在这两个温度环境中平均 95.8%和 86.2% 的样本分别显示 PCR 阴性。在 8℉的温度下,液体消毒剂凝固失效。85℉的温度环境中,有无粪便存在的条件下,液体消毒剂平均 28%和 97.3%的样本分别显示 PCR 阴性。每个靴子清洁槽和 PRRSv PCR 结果之间没有相关性。

在试验 3 中,收集了 210 个血清样本和 40 个 Swiffer 棉块样本,并进行 PRRSv PCR 检测。100%的血清样本检测呈阳性,在检测现场确认感染和疫苗病毒脱落。100%的靴子 Swiffer 棉块样本 PRRSv PCR 检测呈阴性,这表明普境安在实际的保育室环境中,在疫苗病毒感染和脱落存在的情况下有效。 

普境安显示了对液体消毒剂是一种可行的替代产品,可以作为靴子消毒剂,以及在粪便存在和凝固点温度下提供优势。关于病毒失活的结论需要进一步的研究,需使用病毒隔离技术和生物分析来确定病毒的生存能力。

参考文献

1. Hermann, J.R. et al. Probability of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus infection as a function of exposure route and dose. Veterinary Microbiology. 2005: 716.

 

2. Kenney, K and D. Polson. Validation of Swiffer cloth-origin neutralizing broth samples for detection of PRRS virus in the environment. Proc. AASV. 2011: 95107.


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